细菌DNA提取:原理及经典试剂盒

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细菌DNA提取:原理及经典试剂盒

细菌DNA提取是利用细菌生物特性将DNA从细菌体的各种杂质提纯出来,实现细菌DNA提取是很重要的,研究细菌的生物学特性,执行细菌的诊断、定位和鉴定,仿制和培育多种有药效的微生物化药,都需要用到细菌的DNA。

细菌DNA提取原理主要有三步:分解、沉淀和回收等步骤:

第一步是分解,即将有机而无机的杂质分开,然后利用生物化学反应,将核酸从蛋白质中分离出来,以获得原始DNA库;

第二步是沉淀,利用低温或低温加溶解条件,改变DNA的溶解程度,使DNA悬浮在体液中,然后通过离心或电离,将DNA悬液中的细胞残留物聚集沉淀;

第三步是回收和洗涤,经悬液中细胞残留物除去后,将DNA溶液去脓,尤其是氯仿,除去可能污染DNA的有机污染物,然后抽提DNA,就可以得到纯净的DNA提取物了。

提取细菌DNA时,除了人工单独手工操作外还可使用试剂盒,也即细菌DNA提取试剂盒。该试剂盒可以一次性完成多个操作步骤,抗震、去污、清洗及纯化、回收等,所提取出的DNA纯度高,可用于后续的PCR扩增和其他的功能性分析,更加方便快捷。而试剂盒的特性又决定了它的核心成分,一般常用的细菌DNA提取试剂盒都会包含几种特殊添加剂,其中的最关键成分是核酸抽提剂,它是抽提DNA的核心操作,它有助于抽取DNA,一般情况下,试剂会选用专门的抽提剂添加,它可以帮助抽提出细胞体中的DNA,例如SDS及部分的化学溶剂;同时,还会使用抗原表位剂,用于去解决细菌细胞壁处理等问题,以达到提取细胞内DNA的目的;最后,还需要添加一些防腐剂或者抑制剂,以减少酶的活性,起到保护和修复DNA的作用,以能够有效保护DNA稳定性,保证后续分析更加功效。

总之,经典的细菌DNA提取试剂盒包含抗原表位剂、DNA抽提剂及防腐剂等,它们起到分离脱除细菌杂质,保护细菌DNA的作用,可以令DNA提取质量高,结果可靠。

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